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3. Diversas técnicas parasitológicas podem ser utilizadas para diagnóstico de enteroparasitoses e análises epidemiológicas. Um estudante da disciplina de parasitologia clínica leu em um artigo científico dados epidemiológicos sobre enteroparasitoses em um município brasileiro. Os dados relatavam alta prevalência de Ascaris lumbricoides na região. O estudante, conhecendo a forma imatura desse helminto e a sensibilidade das técnicas parasitológicas de fezes, entendeu rapidamente que o método de Hoffmann, Pons & Janer seria o melhor a ser utilizado. Como o estudante chegou a essa conclusão? Resposta incorreta. A. As formas imaturas de helmintos só podem ser detectadas pelo método de Hoffmann; Outros métodos também podem detectar formas imaturas de helmintos. Você acertou! B. As formas imaturas (ovos) de helmintos são pesadas e sedimentam espontaneamente; Os ovos de helmintos são pesados e sedimentam espontaneamente, sendo facilmente identificados pelo método de Hoffmann. Resposta incorreta. C. A etapa de filtração do método permite que as formas imaturas dos helmintos sejam visualizadas. A etapa de filtração não está relacionada à sedimentação dos ovos (formas imaturas) de helmintos.
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4. Lutz descreveu, em 1919, um método que Hoffmann, Pons & Janer adaptaram e melhoraram em 1934. Hoje, a técnica é amplamente utilizada no diagnóstico parasitológico de fezes. Um aluno de parasitologia clínica, estudando o método de Hoffmann, entendeu que há três principais etapas antes da confecção do esfregaço e pesquisa dos parasitos. Quais etapas são essas? Você acertou! A. Misturar e dissolver as fezes em água, filtrar a mistura com uma gaze dobrada em quatro e esperar sedimentar espontaneamente; As etapas do método de Hoffmann envolvem: (1) dissolução das fezes em água; (2) filtração; e (3) sedimentação espontânea em repouso. Resposta incorreta. B. Misturar e dissolver as fezes em água, centrifugar a mistura e esperar sedimentar espontaneamente; Não existe etapa de centrifugação no método de Hoffmann. A mistura é filtrada e passa por sedimentação espontânea. Resposta incorreta. C. Misturar e dissolver as fezes em água, filtrar a mistura com uma gaze dobrada em quatro e esperar sedimentar com sulfato de zinco. O sulfato de zinco é utilizado para uma etapa de flutuação que não existe no método de Hoffmann.
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5. Nenhum método parasitológico permite o diagnóstico de todos os tipos de parasitos e formas parasitárias. Cada método apresenta características e vantagens próprias. Um professor de parasitologia clínica pediu a dois alunos para descreverem uma vantagem do método de Hoffmann. O aluno A respondeu que uma vantagem é a possibilidade de pesquisar trofozoítos no sedimento. O aluno B respondeu que uma vantagem é a facilidade de encontrar ovos de helmintos no sedimento. Qual aluno está correto e por quê? Resposta incorreta. A. Os dois alunos estão corretos. É possível encontrar trofozoítos e ovos de helmintos, que, por serem pesados, se depositam facilmente no sedimento; O método de Hoffmann não preserva os trofozoítos, por isso não é possível detectá-los. Resposta incorreta. B. O aluno A está correto e o aluno B está incorreto. Os trofozoítos são preservados por essa técnica e os ovos de helmintos são muito leves e difíceis de encontrar no sedimento; O método de Hoffmann não preserva os trofozoítos, por isso não é possível detectá-los. Os ovos de helmintos são pesados e podem ser detectados no sedimento (método de Hoffmann). Você acertou! C. O aluno A está incorreto e o aluno B está correto. Os trofozoítos não sobrevivem à técnica e os ovos de helmintos são pesados e podem ser encontrados no sedimento.
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. Para a identificação dos perfis de restrição, diferentes fragmentos de DNA produzidos por clivagem precisam passar por eletroforese em gel. Sobre essa técnica, assinale alternativa correta. A. A eletroforese em gel permite a migração do DNA em direção ao polo elétrico negativo, produzindo a separação dos fragmentos de restrição por tamanho. B. A eletroforese em gel é uma etapa complementar e dispensável para a visualização dos fragmentos de restrição gerados no processo de clivagem enzimática. C. A eletroforese em gel permite a migração do DNA em direção ao polo elétrico positivo, separando os fragmentos de restrição por tamanho.
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Como resultado da eletroforese, é esperada a visualização em gel do conjunto de fragmentos de restrição obtido a partir de cada amostra clivada. Assinale a alternativa que explica a ocorrência do resultado inesperado. A. Nenhuma banda foi visualizada no gel porque a digestão por enzimas de restrição falhou, não gerando fragmentos de DNA; B. Um dos poços do gel não mostrou indício de banda porque a amostra migrou para o lado oposto das demais; C. Nenhuma banda foi visualizada no gel porque a corrente elétrica foi ligada na direção inversa e todas as amostras migraram para fora do gel.
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As enzimas de restrição funcionam como tesouras moleculares capazes de produzir cortes em moléculas de DNA de dupla fita. Sobre isso, assinale a alternativa correta. Você acertou! B. Denomina-se sítio de restrição a sequência específica do DNA reconhecida e clivada por uma enzima de restrição.
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Para a identificação dos perfis de restrição, diferentes fragmentos de DNA produzidos por clivagem precisam passar por eletroforese em gel. Sobre essa técnica, assinale alternativa correta. Resposta correta. C. A eletroforese em gel permite a migração do DNA em direção ao polo elétrico positivo, separando os fragmentos de restrição por tamanho. A eletroforese em gel permite a migração do DNA (carga negativa) em direção ao polo elétrico positivo, separando os fragmentos de restrição por tamanho.
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Sabe-se que a enzima de restrição isolada de Haemophilus aegyptius, denominada HaeIII, reconhece e cliva sequências de DNA 5’ GGCC 3’. Sobre esse tema, assinale a alternativa correta. Você acertou! A. A enzima de restrição HaeIII tem um sítio de restrição palíndromo constituído por quatro pares de bases. Todas as enzimas de restrição têm sítios de restrição palíndromos e, no caso da HaeIII, esse sítio é constituído por quatro pares de bases (5’ GGCC 3’).
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Cada amostra submetida à clivagem por uma determinada enzima de restrição produzirá um número fixo de fragmentos que corresponde ao perfil de restrição da amostra. Sobre as etapas laboratoriais necessárias nesse processo, assinale a alternativa correta. Você acertou! C. A visualização das bandas produzidas pelos fragmentos de restrição só é possível devido à aplicação de um agente intercalante que se integra ao DNA, emitindo fluorescência quando exposto à luz ultravioleta.
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O padrão de bandas formado pelos fragmentos de restrição de uma determinada amostra permite a identificação de indivíduos ou espécies. Sobre isso, assinale a alternativa correta. Você acertou! A. Duas amostras de DNA com sequências idênticas produzirão perfis diversos de restrição se forem clivadas por enzimas de restrição diferentes.
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. Como resultado da eletroforese, é esperada a visualização em gel do conjunto de fragmentos de restrição obtido a partir de cada amostra clivada. Assinale a alternativa que explica a ocorrência do resultado inesperado. Resposta correta. C. Nenhuma banda foi visualizada no gel porque a corrente elétrica foi ligada na direção inversa e todas as amostras migraram para fora do gel.
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A realização bem-sucedida da clivagem enzimática de uma amostra de DNA produziu os seguintes fragmentos: 600pb + 500pb + 200pb. Indique qual das alternativas a seguir representa a falha total no processo de clivagem. Você acertou! B. Fragmento único de 1300pb;
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. Para que a digestão por enzima de restrição ocorra, é necessário que sejam fornecidas condições adequadas para o funcionamento da enzima escolhida. Assinale a alternativa que contém os reagentes necessários para isso. Você acertou! C. Solução com água ultrapura, material genético bacteriano, tampão e enzima de restrição suspensos em banho-maria a 37 ºC por 1 hora.
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Considere uma análise do perfil de restrição obtido a partir de cinco cepas bacterianas submetidas à clivagem pela mesma enzima. Analisando as afirmações a seguir, assinale a alternativa correta. Você acertou! A. A identificação das cepas bacterianas considera o número e o tamanho dos fragmentos de restrição visualizados no gel de agarose após a realização da eletroforese;
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A análise de restrição envolve a clivagem de amostras de DNA por enzima de restrição seguida da análise dos fragmentos produzidos. Relacionado a isso, assinale a alternativa que contém a informação correta. Você acertou! C. Durante a separação dos fragmentos de restrição por eletroforese, fragmentos menores migram mais rapidamente por meio do gel.
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. A utilização da transformação de bactérias competentes permitiu o desenvolvimento de produtos biotecnológicos relevantes para a saúde e a economia. Sobre o processo de transformação, assinale a alternativa correta. Você acertou! A. Utiliza bactérias para a replicação de um gene de interesse e a produção de moléculas desejadas.
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. Sobre a técnica que transfere o vetor plasmideal contendo o gene de interesse para o interior de uma bactéria capaz de replicá-lo, assinale a alternativa correta. Resposta correta. B. A aplicação de choque térmico produz alterações na estrutura da membrana bacteriana, criando poros que permitem a entrada do vetor.
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. Para que a transformação bacteriana aconteça, um vetor capaz de conter e transportar o gene de interesse precisa ser produzido. Sobre as características do plasmídeo, assinale a alternativa correta. Você acertou! A. São moléculas extracromossômicas de DNA circular existentes em bactérias, as quais apresentam sítios de restrição que permitem a inserção do gene de interesse.
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. A técnica de transformação envolve a captação de um vetor contendo o gene de interesse por uma bactéria. Sobre o conceito de bactéria competente, assinale a alternativa correta. Resposta correta. C. É a bactéria capaz de internalizar e replicar um fragmento de DNA exógeno
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. Após realizar o choque térmico e incubar a mistura de bactérias e plasmídeos em meio de cultivo, é necessário selecionar as bactérias transformadas. Sobre essa etapa, assinale a alternativa correta. Você acertou! C. A expressão do gene repórter permite que somente as bactérias transformadas sobrevivam no meio de cultura utilizado.
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6. A utilização de amostra controle contendo a bactéria competente sem a adição do plasmídeo durante a realização da transformação permite verificar a ocorrência de erros e contaminações. Sobre isso, assinale a alternativa correta.​​​​​ Você acertou! C. A ausência de bactérias na amostra controle e a proliferação na placa das bactérias transformadas indicam o sucesso da transformação.
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Após o cultivo das bactérias transformadas em meio contendo o antibiótico de seleção, um estudante observou placas com contaminação por bactérias e fungos desconhecidos. Assinale a alternativa que explica o ocorrido. Você acertou! A. A esterilização da alça de Drigalski não foi realizada corretamente antes da realização de cada cultivo.
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. Ao realizar um experimento com bactérias, alguns cuidados precisam ser tomados para evitar a contaminação dos materiais utilizados. Sobre isso, assinale a alternativa correta. Você acertou! C. Para a correta esterilização, a ponta da alça de Drigalski precisa passar cinco vezes pela chama do bico de Bunsen.
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A seleção das bactérias transformadas ocorre através do seu cultivo em meio contendo um antibiótico de seleção. Assinale a alternativa que explica a situação caso nenhuma proliferação seja observada ao realizar a seleção. Você acertou! C. A transformação falhou porque o choque térmico não foi realizado corretamente e o plasmídeo recombinante não pôde ser internalizado pela bactéria.
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