Dr. Hans Cristian Gram, em 1884, observando que as bactérias eram transparentes e muito pequenas, criou um método de coloração das paredes celulares das bactérias, denominado coloração de Gram, o qual permite classificar as bactérias em gram positivas e negativas pela diferença da estrutura da parede e membrana celular das bactérias.

Para que o procedimento seja eficiente, é necessário seguir os procedimentos em ordem específica. Analise as afirmativas a seguir:



1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos. É um corante primário, o qual as células gram-positivas não são descoradas, permanecendo com a coloração violeta.

2. Em seguida adicione igual quantidade de água sobre a lâmina e deixe agir por mais 45 segundos e lave em um filete de água corrente.

3. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante. Lave em um filete de água corrente. O álcool é um agente descolorante, O álcool é um agente descolorante, que remove a coloração púrpura das células de algumas espécies, mas não de outras.

4. Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente. O lugol tem efeito mordente e não corante, ou seja, fixa o corante nas estruturas coradas.

5. Deixe secar ao ar livre e após coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e leia em objetiva de imersão (100 X).

6. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos. Lave em um filete de água corrente. A safranina cora as bactérias gram-negativas de rosa/vermelho e é chamado de rosa/vermelho e é chamado de contrastante.

Assinale a opção que apresenta a ordem correta dos passos realizados.

Escolha uma:
a.
1 – 2 – 4 – 3 – 6 – 5.

b.
3 – 4 – 5 – 1 – 2 – 6.

c.
1 – 2 – 4 – 3 – 5 – 6.

d.
3 – 6 – 4 – 1 – 2 – 5.

e.
1 – 4 – 2 – 5 – 3 – 6.